高壓蒸汽滅菌器在使用時，一定將滅菌器中的冷空氣排除干凈。因為空氣的膨脹壓力大于水蒸氣的膨脹壓力，當水蒸氣中含有空氣時，壓力表上所示的壓力不是水蒸氣的實際壓力，而是水蒸氣壓力和空氣壓力的和。因為在相同的壓力下，含空氣的蒸汽的溫度低于飽和蒸汽的溫度，所以當滅菌器加熱達到需要的滅菌壓力時，如果含有空氣，滅菌器內達不到所需的滅菌溫度，就達不到應有的滅菌效果。
1.堆放滅菌物品時，應確保留出足夠的空隙，不能堵塞安全閥、放汽閥的出氣孔，以確保空氣的順暢，確保安全。
2.滅菌器應放置在合適的環境，應通風干燥，無易燃易爆物品。
3.滅菌器使用后，應將容器內的水清除，容器或電熱管上如有水垢也應進行清理，以延長壽命。
4.應將液體灌裝在耐熱玻璃瓶中進行滅菌，液體不應超過瓶體積3/4，瓶口不宜使用打孔的橡膠或軟木塞，而應用棉花紗塞。
5.與蒸汽介質接觸引起爆炸或突然升壓性的化學物品，不能用滅菌器進行滅菌。
6.定期檢查安全閥，當安全閥不合格時應立即更換。
7.滅菌結束后，不能立即釋放蒸汽，必須待壓力表指針回零后方可排放余氣。
8.經常檢查密封圈密封性，并及時更換。
9.不要拆啟安全閥、放汽閥上鉛封和螺絲等。
10.為了確保安全使用，應確保滅菌器電源線擁有良好的接地。
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